Biokémiai gyakorlatok

1. BIOKÉMIAI ELVÁLASZTÁSTECHNIKAI GYAKORLATOK
1.1. Aminosavak szétválasztása és meghatározása ioncserés vékonyréteg-kromatográfiával
1.2. Cukrok elválasztása és kvalitatív analízise vékonyréteg-kromatográfiás eljárással
1.3. Lipidek vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálata
1.4. Fehérjeoldat sómentesítése gélszűréssel
1.5. Fehérjék móltömegének meghatározása gélkromatográfiával
1.6. Szérumfehérjék elválasztása ioncserével DEAE-cellulóz oszlopon
1.7. Savas foszfatáz izoenzimek szétválasztása DEAE-cellulóz oszlopon
1.8. A GAPD affinitáskromatográfiás tisztítása
1.9. Fehérjék molekulatömegének meghatározása SDS gélelektroforézissel
1.10. Fehérjék izoelektromos pontjának meghatározása

2. AMINOSAVAK, FEHÉRJÉK ÉS ENZIMEK
2.1. Aminosavak és fehérjék vizsgálata
2.1.1. Fenilalanin és triptofán oldat spektrumának felvétele és koncentrációjának meghatározása
2.1.2. Aminosavak pK értékeinek meghatározása titrálással
2.1.3. N-terminális aminosavak meghatározása danzil reagenssel
2.1.4. Aminosavak kvantitatív meghatározása ninhidrin reakcióval
2.1.5. Fehérjék kvantitatív meghatározása Biuret reakcióval, Bradford és Folin reagenssel, valamint UV abszorpciójuk alapján
2.1.6. Fehérje konformáció változásának vizsgálata tripszines emészthetőség mérésével
2.1.7. Citokróm c preparálása
2.1.8. Citokróm c oxidált és redukált formáinak spektrofotometriás mérése a látható színképtartományban
2.1.9. α-krisztallin preparálás marha szemlencséből
2.2. Enzimológiai mérések
2.2.1. Tirozináz aktivitás megoszlása gombában
2.2.2. Kísérletek fehérjebontó enzimekkel
2.2.3. Tripszin aktivitásának meghatározása Anson teszttel
2.2.4. Tripszin esszenciális szerin OH-csoportjának módosítása PMSF-dal. A tripszin koncentráció meghatározása specifikus gátlás segítségével
2.2.5. Savas foszfatáz izolálása búzacsírából
2.2.6. Savas foszfatáz kinetikai vizsgálata
2.2.7. Savas foszfatáz szubsztrátspecifitásának, gátlásának és stabilitásának vizsgálata
2.2.8. Kísérletek alkalikus foszfatázzal
2.2.9. A torma peroxidáz vizsgálata
2.2.10. Apiráz enzim preparálása
2.2.11. Apiráz enzim aktivitásának mérése
2.2.12. Gliceraldehid-3-foszfát dehidrogenáz izolálása sertés-vázizomból, a GAPD átkristályosítása és aktivitásának mérése
2.2.13. A GAPD szulfhidril csoportjainak szerepe a NAD+ koenzim megkötésében
2.2.14. A GADP szulfhidril csoportjainak analízise Ellmann reakcióval
2.2.15. D-aminosav oxidáz holoenzim aktivitásának mérése
2.2.16. D-aminosav oxidáz (DAO) szerkezetének és működésnek vizsgálata
2.2.17. Lizozim tisztítása tojásfehérjéből, tisztaságának ellenőrzése gélelektroforézissel
2.2.18. α-kimotripszin inaktiválódásának vizsgálata etanol jelenlétében
2.2.19. α-kimotripszin stabilizálása etanolos közegben polietilén glikollal
2.2.20. α-krisztallin stabilizáló hatásának vizsgálata
2.3. Kísérletek rögzített enzimekkel
2.3.1. Tejsav dehidrogenáz rögzítése
2.3.2. A rögzített tejsav dehidrogenáz tulajdonságainak vizsgálata
2.3.3. LDH enzim oszlopreaktorral végzett analitikai meghatározások
2.3.4. Glükóz oxidáz rögzítése

3. NUKLEINSAVAKKAL KAPCSOLATOS GYAKORLATOK
3.1. Májszövet DNS és RNS tartalmának meghatározása
3.1.1. DNS meghatározása difelnilaminnal
3.1.2. RNS meghatározása orcinol reagenssel
3.2. DNS és RNS megoszlásának meghatározása a differenciál centrifugálással nyerhető sejtmag és felülúszó frakciókban
3.3. DNS preparálás baktériumtenyészetből és a preparált DNS tisztaságának ellenőrzése agaróz gélen
3.3.1. DNS preparálás Escherichia coli baktériumtenyészetből
3.3.2. E. coli DNS preparátum tisztaságának ellenőrzése agaróz gélen
3.4. DNS hiperkróm effektusának vizsgálata
3.5. Nukleinsavak hidrolízise és vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálata

4. SZÉNHIDRÁTOK VIZSGÁLATA
4.1. Összcukortartalom meghatározása biológiai objektumokban
4.1.1. A biológiai minta fehérjementesítése
4.1.2. Összcukortartalom meghatározás Anthron módszerrel
4.2. Glükóz mennyiségi meghatározása glükóz oxidázzal
4.3. Glikogén izolálása májból és szerkezetének vizsgálata
4.3.1. Glikogén izolálása májból
4.3.2. A glikogén tisztaságának meghatározása
4.3.3. A glikogén molekula szerkezetének vizsgálata

5. LIPIDEK VIZSGÁLATA
5.1. Foszfolipidek kvantitatív meghatározása
5.2. Neutrális zsírok enzimatikus hidrolízise
5.3. Foszfatidil-kolin és koleszterin preparálása tojássárgájából
5.4. Foszfatidil-kolin és koleszterin tisztaságának ellenőrzése vékonyréteg-kromatográfiával

6. ÖSSZETETT BIOKÉMIAI RENDSZEREK VIZSGÁLATA
6.1. Az aktív transzport vizsgálata élesztősejtekben
6.2. Permeabilitás vizsgálatok liposzómákon
6.3. Enzimek szubcelluláris lokalizációja
6.4. Élesztősejtek rögzítése
6.4.1. A pH hatásának vizsgálata a rögzített sejtek etanol fermentáló képességére
6.4.2. Rögzített élesztősejtek etanol termelése
6.4.3. Etanol termelés szabad és rögzített élesztősejtekkel
6.5. Glikolízis tanulmányozása patkány vörösvértestekkel
6.6. Halak citokróm P450 függő monoxigenázainak vizsgálata

7. KÖRNYEZET-BIOKÉMIAI VIZSGÁLATOK
7.1. Szövetkárosodás detektálására alkalmas enzimek (GOT, GPT) vizsgálata ponty szövethomogenizátumaiban
7.2. Stresszhatás kimutatása vércukor- és LDH-szint mérésével pontyban
7.3. Peszticidek okozta idegrendszeri károsodás detektálása
7.4. A kolinészteráz in vitro gátlása methidationnal (számolási gyakorlat)
7.5. Az acetil-kolinészteráz molekuláris formáinak megoszlása tavi ponty szerveiben
7.6. Az LDH izoenzimek kinetikai mérése ponty szív- és laterális fehér izmából
7.7. Hőmérsékleti akklimatizáció hatása az aerob és anaerob anyagcserére
7.8. Az oxidatív stressz mérése